大鼠鼻黏膜上皮细胞NMEC的分离一简介鼻是呼吸和嗅觉器官。鼻腔内表面为黏膜由上皮和固有层构成黏膜下方与软骨、骨或骨骼肌相连。根据鼻黏膜的部位和功能分为前庭部呼吸部和嗅部。前庭部是邻近外鼻孔的部分有丰富的鼻毛可以阻挡空气中较大的尘粒吸入。呼吸部占鼻黏膜的大部有发达的上皮纤毛它们可向咽部摆动黏着有尘粒、细菌的黏液排向咽部最终将它们排出体外。二、材料1、实验动物8周龄左右的SD大鼠10只雌雄不限2、组织来源鼻腔内黏膜3、手术器材手术剪镊、解剖镊、眼科剪镊4、消化酶链霉蛋白酶E胰蛋白酶培养基 DMEM/F1210%FBS1%双抗 5ng/mlEGF50nmol氢化可的松①DMEM/F12GibcoCat#: 51500056②EGF(Cloud-CloneCat#:APA560HU02③氢化可的松aladdinCat#: H1105236、包被鼠尾胶原I三、实验步骤1. 培养瓶的包被按照2ug/cm2将鼠尾胶原I加入T25培养瓶中以覆盖培养板底部为准37℃培养箱内放置30min临用前用PBS清洗2次于超净台中晾干备用。2. 颈椎脱臼法处死大鼠置于75%酒精浸泡5min。3. 剪开两侧鼻腔剪下并取出鼻中隔置于预冷的含2%双抗PBS中并用2%双抗的PBS冲洗3次。4. 用镊子将黏膜部分取出转移至另一培养皿中并用PBS漂洗1-2次。5. 将黏膜组织转移至新的离心管中加入5mL 浓度为0.15% 链霉蛋白酶E 4℃消化14~18h。6. 取出离心管轻缓倒置10~12次继续4℃消化30~60分钟。7. 将上述消化后的组织置于一个新的培养皿中并加上适量的含10%FBS的DMEM/F12培养基用镊子将黏膜层反复刮净此步骤重复3次。8 将上一步剩余组织继续加入0.25%胰蛋白酶在37℃中消化30min加入完全培养基终止消化并收集细胞悬液。9. 收集第7和8步骤细胞悬液200目过筛1200rpm 离心10min收集沉淀。10. 细胞沉淀中加入完全培养基DMEM/F1210%FBS1%双抗5ng/mlEGF50nmol氢化可的松重悬并接种于提前包被的培养瓶内。11. 细胞增殖缓慢7d后细胞呈岛屿一片一片生长10d后细胞密度可达到80%左右后续根据实际情况进行传代或冻存。四、鼻黏膜组织取材过程图三消化后铺板的鼻黏膜上皮细胞各阶段的膀胱上皮细胞照片白光原代培养10天有大量上皮细胞样长出呈岛屿状向四周伸展100X、200X六、大鼠鼻黏膜上皮细胞的鉴定常用鉴定方法CK-18特异性抗体免疫荧光鉴定CK18抗体来自Cloud-Clone Corp 公司云克隆原创此Protocol同时适用于小鼠大鼠、兔犬羊等物种。欢迎大家讨论和索要原代细胞相关资料云克隆深耕原代细胞领域近二十年持续扩容猪、犬、猫、羊、豚鼠等多物种原代细胞资源库。公司拥有自建的SPF级实验动物中心与GMP级细胞制备平台严控细胞活性、纯度与溯源性。从供体筛选、组织采集到细胞分离与放行检测全程在自有体系内完成。公司已通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证。作为国内少数具备细胞出口资质的高新技术企业云克隆目前现货原代细胞品类已突破560种稳居国内动物源原代细胞品类最全、出货量最大、出口量领先的标杆地位。豚鼠原代细胞矩阵已覆盖骨骼关节、脂肪组织、呼吸、心血管、皮肤、生殖、神经、角膜等多个研究方向。